løb på nogenlunde samme sted som den nuværende Via Merulana fra Lateran-grundene til Esquilinhøjen, men i en lidt anden retning, da den startede lidt sydvest for den nuværende kirke Santi Marcellino e Pietro og gik mod nordøst (hvor den moderne vej går let mod nordvest) op og skråt ind over den nuværende Piazza Vittorio Emanuele II til dennes nordvestlige hjørne ved Via Napoleone III.

På vestsiden af den antikke vej lå oppe mod nord i det 1.århundrede før Kristus de berømte Horti Maecenatis på den grund, som ejedes af Kejser Augustus' ven og rådgiver Maecenas.

Vejens navn skyldes den gammelt-romerske familie Merula, som havde en ejendom, Domus Meruli, i dette område omtrent fra den nuværende Via Angelo Poliziano til Piazza di San Giovanni in Laterano. Heraf fik området navnet Campus eller Prata Meruli.

På det nederste vestlige stykke af vejen lå der på Colle Oppio's skråning et stort Tempel for Isis og Serapis, som den ægyptiske koloni i området havde ladet rejse. Dette tempel var årsagen til at regionen under Kejser Augustus' reorganisering af byen i regioner fik navnet III Regio Augustea Ab Isis et Serapis, et tilnavn som derpå også knyttedes til hovedvejen gennem regionen.

I Antikken startede vejen sydpå ved Via Lupanaria, der fortsatte Via Tusculana efter Porta Caelimontana. Her lå i starten af vejen på vestsiden en ejendom, som muligvis kan identificeres som Domus Annius Verus, mens der højere oppe og modt øst lå en kaserne Castra Prioria.

Via Merulana krydsede derpå den sydlige Via Labicana ved Isis-buen, Arcus ad Isis, lige sydfor den nuværende kirke Santi Marcellino og Pietro, som er anlagt i det 4. århundrede.

Lidt nord herfor lå så på vestsiden af vejen det store Isis-Tempel og tæt på det Bellona Rufilia's Tempel. Derpå fulgte Minerva Medica's Tempel og den gamle kirke San Mathaeus fra det 3.-4.århundrede. Mellem denne og en anden gammel kirke San Severinus lå så Domus Meruli. Vejens østside var derimod optaget af det store parkanlæg Horti Lamiani et Maiani.

Lidt øst for Porta Esquilina, der idag kendes som Gallienus-Buen, stødte Via Merulana så sammen med den nordre Via Labicana på et sted, der omtrent svarer til det nordøstligste hjørne af Piazza Vittorio Emanuele II ved Via Napoleone III. Heroppe nord for krydset lå et Tempel for Jupiter Dolichenus og det man idag kender som "Trofei di Mario" samt kirken Sant'Eusebius.

Hvor den moderne Via Merulana krydses af Serviusmuren ved Largo Leopardi, lå den antikke vej udenfor den gamle beskyttende bymur. Den blev dog del af byområdet, da Den Aurelianske Mur blev bygget i det 3.århundrede efter Kristus.