Guido Reni var født den 4. November 1575 i Calvenzano i nærheden af Bergamo i Norditalien. Han fik sin første uddannelse i Denys Calvaert's malerskole i Bologna og kom i 1595 til at arbejde i Carracci-familiens værksted i samme by.

I 1600 kom Guido Reni til Rom, men vendte hjem igen i 1603. I 1605 var han atter i Rom og medlem af kunstnersammenslutningen Accademia di San Luca. Han opnåede nu Kardinal Scipione Borghese's bevågenhed og fik hermed en mængde bestillinger, som han udførte for Kardinalen og dennes onkel, Pave Paul V, i de næste 10 år.

Herefter rejste Guido Reni på et tidspunkt (i 1614 iflg. nogle, i 1622 iflg. andre) tilbage til sin hjemegn, hvor han boede til sin død, der indtraf den 18. August 1642 i Bologna.

Af Guido Reni's arbejder i Rom kender vi blandt andre:

I kirker:

I Kirken San Carlo ai Catinari: fresko af San Carlo Borromeo.

I Kirken Santa Cecilia: Santa Cecilia's martyrium.

Ved Kirken San Giovanni in Laterano: i Battistero Lateranense/San Giovanni in Fonte: fresko af San Filippo Neri.

I Kirken San Gregorio Magno:
- Oratorio di Santa Silvia: fresko med musicerende engle ("Concerto di angeli"), ca. 1608.
- Oratorio di Sant'Andrea: fresko med Sant'Andrea ("Martirio di Sant'Andrea"), 1608.

I Kirken San Lorenzo in Lucina: maleri af Den Korsfæstede Kristus.

I Kirken San Luigi dei Francesi: Kopi af Santa Cecilia af Raphael.

I Kirken Santa Maria della Concezione: maleri af San Michele.

I Kirken Santa Maria in Montesanto: et maleri af Kristus.

I Kirken Santa Maria in Vallicella: maleri af Madonna og San Filippo Neri.

I Kirken Santa Maria della Vittoria: Kardinal Berlinghiero Gessi.

I Kirken San Paolo fuori le Mura: Santa Margherita da Cortona.

I Kirken Santissima Trinità dei Pellegrini: kuppelfresko med motivet Gud Fader og højaltermaleri af Treenighen.

I palæer og gallerier:

I Galleria Albani: malerier af Joseph, Jomfru Maria, Bacchus og Ariadne.

I Galleria Barberini: malerier af en sovende Cupido, Sant'Andrea Corsini i ekstase, Beatrice Cenci.

I Galleria Borghese: maleri af Moses med De Ti Bud.

I Palazzo Pallavicini Rospigliosi:
- i Casino dell'Aurora: loftsmaleriet Aurora fra 1614
- i Casino dell'Aurora hænger også en del af Pallavicini-Rospigliosi-familiens malerisamling, blandt andre: Guido Reni's "Crocifisso" ("Den Korsfæstede") fra ca. 1638-1640 og "Andromeda liberata da Perseo" ("Andromeda befries af Perseus") fra ca.1635.
- i loggia'en, også kaldet Sala del Pergolato, udførte Guido Reni og Paul Brill den smukke dekoration "Il Pergolato".

I Palazzo del Quirinale, Cappella dell'Annuziata: fresker ("Storie della Vergine") og Altertavlen Mariae Bebudelse (1610-1611).

I Palazzo del Vaticano, Sala delle Nozze Aldobrandine: 3 fresker fra 1609.

I Vatikanet: maleriet "Crocifissione di San Pietro" ("Sankt Peters Korsfæstelse"), oprindeligt malet til Kirken San Paolo alle Tre Fontane i 1603.

Derudover findes Guido Reni's værker i de fleste andre romerske gallerier og i gallerier over hele verden.